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大口径毛细管气相色谱法快速测定MRS肉汤培养基中水溶性胆固醇

   建立了MRS 肉汤培养基中水溶性胆固醇的气相色谱测定法。1 mL 样品( 含水溶性胆固醇的MRS肉汤培养基) 与5 mL 0. 5 mol /L KOH-甲醇溶液混合,然后于60 ℃水浴皂化30 min。产物游离胆固醇经5 mL甲苯萃取后,采用HP-5 大口径石英毛细管柱( 30 m × 0. 53 mm i. d. × 1. 5 μm) 进行分离、FID 检测器进行检测、外标法进行定量分析。本方法分析一个样品仅需45 min; 在5 ~ 250 mg /L 浓度范围内线性关系良好; 回收率为95. 6% ~ 98. 0%; 日内与日间相对标准偏差分别为1. 6%和1. 9%。本方法具有快速、简便、准确等优点。

    水溶性胆固醇是一类由人工合成的化学物质,在自然界中并不存在。Proksch 等于1978 年首次报道了以胆固醇、二元酸和聚乙二醇为原料合成水溶性胆固醇的工艺路线。水溶性胆固醇最初被用于质控血清中的胆固醇源,后来其应用范围逐渐扩展。在微生物学领域,水溶性胆固醇主要用于研究乳酸菌体外对培养基中胆固醇的脱除作用。由于胆固醇本身不溶于水,因此在添加到培养基之前必须进行乳化处理,以使其在水相中能稳定存在。而水溶性胆固醇在水中则具有高达60 g /L 的溶解度,无需乳化便可直接添加到培养基中,因而被广泛应用。
   为了模拟肠道环境,培养基中水溶性胆固醇的添加量通常为100 mg /L 左右。不同乳酸菌对培养基中水溶性胆固醇的脱除能力有很大差别。某些乳酸菌对培养基中水溶性胆固醇的脱除能力可高达80%。这表明当培养结束后,培养基上清液中的水溶性胆固醇的浓度可降低至20 mg /L 左右。硫酸-邻苯二甲醛比色法是目前唯一能够对如此低含量胆固醇进行检测的比色法,因而被广泛应用。然而,该方法偶尔会出现原因不明的实验结果不可重复的现象。因此,有必要开发一种稳定性更好的检测方法。本研究对气相色谱测定培养基中水溶性胆固醇的方法进行了研究,获得了较满意的结果。
点击次数:  更新时间:2013-01-19 16:23:19  【打印此页】  【关闭